重组腺病毒介导神经生长因子转染实验性自身免

来源：中国实验方剂学杂志 【在线投稿】栏目：期刊导读时间：2021-03-02

背景:神经生长因子对正常的神经元凋亡具有抑制效应,能够提高其损伤修复的能力,在一些自身免疫性疾病中发挥治疗作用。目的:观察经外周转染重组腺病毒介导神经生长因子基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠少突胶质细胞凋亡及髓鞘化的影响。方法:将30只雌性健康的C57BL/6小鼠随机分为3组,每组10只:正常组不进行任何处理;对照组采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽免疫法建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,建模后第3天尾静脉注射生理盐水,连续注射21 d;转染组同样建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,建模后第3天尾静脉注射转染重组腺病毒介导神经生长因子基因,连续注射21 d。疾病高峰期处死小鼠,利用LFB染色行髓鞘组织形态病理观察,免疫荧光法观察脊髓组织中凋亡蛋白Caspase3与少突胶质细胞的表达及共定位情况,RT-PCR法检测脊髓组织中神经生长因子、髓鞘碱性蛋白mRNA水平,Western blot法检测脊髓组织中神经生长因子、Caspase3蛋白水平,Elisa法检测脊髓组织髓鞘碱性蛋白水平。实验操作过程通过西南医科大学动物实验伦理审查(-8)。结果与结论:①LFB染色显示,对照组脊髓组织有明显的脱髓鞘改变,转染组髓鞘脱失有显著改善;②免疫荧光显示,对照组脊髓组织少突胶质细胞中Caspase3呈明显的点状聚集,转染组聚集现象不明显;③RT-PCR检测显示,与正常组、转染组比较,对照组的髓鞘碱性蛋白、神经生长因子mRNA表达降低(P <0.05);④Western blot检测显示,与正常组、转染组比较,对照组的Caspase3蛋白水平升高(P <0.05)、神经生长因子蛋白水平降低(P <0.05);⑤Elisa检测显示,对照组髓鞘碱性蛋白水平低于正常组、转染组(P <0.05);⑥结果表明,经外周转染的重组腺病毒介导神经生长因子基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有防治作用,其机制可能与上调神经生长因子水平、下调少突胶质细胞中凋亡蛋白Caspase3、提高髓鞘碱性蛋白表达而改善髓鞘脱失有关。